看了半天文献里的Co-IP结果图，跟原文反复对比，就是看不懂是什么意思……大家也会碰到这样的情况吗😭？今天给大家整理了比较详细的笔记，找了三张比较典型的Co-IP图，给大家一一分析，赶紧跟上我们，一起来解读高分文献中的Co-IP图吧~

导读

1.Co-IP的定义&用途

2.Co-IP解读案例1

3.Co-IP解读案例2

4.Co-IP解读案例3

01

Co-IP的定义&用途

定义

免疫共沉淀技术是一种研究两种蛋白在体内是否存在相互作用的有效方法，通过抗体和已知蛋白结合，从而捕获整个已知蛋白复合物，进而研究复合物中与已知蛋白存在相互作用的蛋白。

用途

蛋白质相互作用：测定两种目标蛋白质是否在体内结合；

蛋白质伴侣：确定一种特定蛋白质的新的作用搭档；

蛋白质复合物分离：分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。

02

Co-IP怎么看？（具体案例）

案例解读1

①IP:说明用什么抗体拉的，这里是利用CXCR3作为诱饵蛋白，用它的抗体下拉蛋白

②用CXCR3抗体与其本身结合，出现条带，说明抗原抗体结合没有问题

③CXCR3和Beclin1相互作用

④内参组全部是阳性结果，阴性对照全部是阴性结果，才能确保实验可信

⑤IB：是WB所用到的抗体

⑥内参：制备完样品之后，对所有的蛋白进行WB直接得出的结果

⑦阴性对照：IgG是一种非特异性抗体，如果它跟任何一个蛋白质有结合出现条带的话，实验结果不可信

结论

免疫共沉淀结果表明在正常人甲状腺上皮细胞系中，CXCR3与Beclin1存在相互作用。

案例解读2

①分子量大小

②不同的细胞系名称

③内参蛋白：验证实验条件、排除非特异性结合，并作为实验重复性和准确性的内部对照

④WCL:全细胞裂解液

⑤实验组免疫共沉淀的蛋白样品

⑥IB：是WB所用到的抗体

⑦对照组

⑧使用两种不同的shRNA构建体敲除PRMT1（KD）

⑨敲除PRMT1#1和PRMT1#2后，2、3泳道比1泳道亮度下降；5、6泳道比4亮度下降

结论

当使用两种不同的shRNA构建体敲除PRMT1（KD）时，FBXO7和PRMT1的相互作用被大幅度消除。

案例解读3

①GFP-PRMT1（指示WT或KR突变体）

②“+”表示添加此条件；“-”表示不添加此条件（条件可为某蛋白、某gene、某抑制剂等）

③分子量大小

④阳性对照

⑤实验组免疫共沉淀的蛋白样品

结论

1、2泳道结果表明，重组后的FLAG-FBXO7在FBXO7 KD Huh7细胞中的表达明显提高了野生型GFP-PRMT1的泛素化水平。2~5泳道结果表明在GFP-PRMT1的K82R、K202R和K325R突变体中也可以观察到PRMT1泛素化的增加，而在K37R突变体中则没有。此外，过表达FLAG-FBXO7导致野生型PRMT1水平明显下降，但对其表达无明显影响。

以上就是今天关于【Co-IP】的相关内容，继续期待下期【文献读图】的精彩内容吧~

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